L'edificio viene costruito agli inizi del cinquecento per Tizio di Spoleto, maestro di camera del cardinale Alessandro Farnese, futuro papa Paolo III.
Le pitture esterne sono una delle prime opere personali di Federico Zuccari. Secondo il Vasari, gli affreschi sono stati realizzati grazie all'intercessione del fratello, Taddeo Zuccari, nella cui bottega stava effettuato il tirocinio dal suo arrivo a Roma nel 1550.
Le figure rappresentano scene della vita di S. Eustachio, tra cui il Battesimo e il Martirio. Lo stemma di Pio IV Medici, ci indica come data di realizzazione il 1559, anno della sua elezione al pontificato.
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