Le palais, actuellement la résidence du président du Sénat, appartenait à la famille Giustiniani, qui l'a acheté en 1590 après s'être transférée à Rome provenant de l'île de Scio dans la mer Égée, suite à la reconquête de l'île par les Turcs. Probablement, le noyau d'origine du palais, ou sa première rénovation, était dû à Giovanni Fontana vers 1585.
Avec le prestige croissant acquis par la famille Giustiniani, à partir de 1650, des travaux considérables ont été entrepris pour agrandir le palais, selon certains plans de Borromini. Les travaux se sont poursuivis jusqu'au début du XVIIIe siècle, avec la construction du grand escalier et de la cour, en arrivant à intégrer des bâtiments jusqu'à la Piazza della Rotonda. Le palais abritait l'importante collection de sculptures et de peintures de Vincenzo Giustiniani (1564-1637), qui comprenait également des œuvres de Caravaggio, Raffaello, Giorgione, Tiziano et Andrea del Sarto, ainsi que de nombreuses pièces de l'époque romaine. Pour cette raison, le bâtiment est devenu une destination pour les artistes et les érudits jusqu'à tout le XVIIIe siècle, et a été décrit dans de nombreux guides de l'époque. Avec la dispersion de sa collection entre la fin du XVIIIe et le début du XIXe siècle, le palais a connu une période de dégradation.
En 1898, il est devenu le siège de la franc-maçonnerie du Grand Orient d'Italie. En 1943, il a été acheté par l'État et, après quelques restaurations, destiné à être la résidence du président du Sénat. Dans la salle de la bibliothèque, la Constitution de la République italienne a été signée par le président de la République Enrico De Nicola le 27 décembre 1947. Le palais est relié au Palazzo Madama, siège du Sénat, par une galerie souterraine construite en 1938.
La façade principale a un grand portail décentralisé avec des colonnes et un balcon et, sur les côtés, trois et cinq grandes fenêtres avec grilles. Au premier étage, il y a des fenêtres avec des architraves, tandis qu'au deuxième et au troisième étage, des fenêtres à cadre simple. Le même schéma architectural se retrouve sur les autres côtés du bâtiment, sur la via dei Giustiniani et sur la salita de Crescenzi.
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